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12月14日的直播中，普諾賽直播間為大家介紹了細(xì)胞黑點(diǎn)、細(xì)胞狀態(tài)變形、細(xì)胞空泡、聚團(tuán)、脫落等常見(jiàn)問(wèn)題，直播回放請(qǐng)至B站 -“普諾賽生物"進(jìn)行觀看。本期直播答疑，從直播間提問(wèn)中，篩選出部分有代表性的問(wèn)題，做了詳細(xì)解答。如有其他問(wèn)題，也歡迎大家在公眾號(hào)留言，我們將在線解答。
消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞嗎？
消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白的改變，最直觀的表現(xiàn)就是消化后第二天漂浮細(xì)胞很多或者貼壁慢。
胰酶消化不掉的，二次消化對(duì)細(xì)胞損傷
小還是機(jī)械吹打?qū)?xì)胞損傷??？
建議二次消化。細(xì)胞與細(xì)胞間的連接沒(méi)有通過(guò)酶切開(kāi)的話，用移液槍進(jìn)行吹散后細(xì)胞會(huì)被撕裂，直接導(dǎo)致細(xì)胞不貼壁甚至死亡。
懸浮細(xì)胞聚團(tuán)怎么處理？
懸浮細(xì)胞聚團(tuán)，要分情況進(jìn)行處理：
? 原本就是聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞，不用干預(yù)，比如NK-92等就是聚團(tuán)生長(zhǎng)；
? 如果是非聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞，比如THP-1聚團(tuán)了，要區(qū)分高密度和低密度。高密度可以輕輕吹散細(xì)胞后進(jìn)行低速離心，去除里面夾雜的死細(xì)胞，正常傳代即可改善；
? 非聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞低密度時(shí)，聚團(tuán)一般是細(xì)胞狀態(tài)不太好，需要調(diào)整狀態(tài)。排查是否有污染以及培養(yǎng)環(huán)境合不合適等問(wèn)題，對(duì)癥改善后細(xì)胞即可正常生長(zhǎng)，聚團(tuán)改善；
? 剛復(fù)蘇的懸浮細(xì)胞也會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)，一般是靜置培養(yǎng)和少動(dòng)，期間可以用補(bǔ)液和半換液的方式培養(yǎng)，等細(xì)胞密度長(zhǎng)起來(lái)，生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，團(tuán)塊問(wèn)題也會(huì)改善。
培養(yǎng)細(xì)胞系有很多無(wú)規(guī)則運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn)，
培養(yǎng)基未渾濁、變黃，細(xì)胞生長(zhǎng)速度不
變，形態(tài)變化不大。請(qǐng)問(wèn)這是什么污染？
這個(gè)情況比較符合血清沉淀或者細(xì)胞碎片分泌物之類(lèi)的，一般不用過(guò)于關(guān)注，細(xì)胞能夠茁壯生長(zhǎng)就可以了。
豬肺泡巨噬細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)，一般可以傳多
少代以?xún)?nèi)？
如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細(xì)胞，一般是終末分化的細(xì)胞，是不能增殖的，只能轉(zhuǎn)移到孔板做實(shí)驗(yàn)。
要收集細(xì)胞分泌的蛋白時(shí)，培養(yǎng)基中加
不加FBS？應(yīng)該怎么選擇？
一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的。血清里面可能有一些蛋白類(lèi)未知成分，不排除會(huì)和實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)蛋白有反應(yīng)或者類(lèi)似，所以通常都是用的無(wú)血清。
提取的原代細(xì)胞不貼壁，怎么辦？
原代組織分離后體外培養(yǎng)通常會(huì)有類(lèi)似的問(wèn)題，需要選擇合適的包被試劑進(jìn)行輔助貼壁，這是原代提取比較常見(jiàn)的操作。
如果對(duì)細(xì)胞的均勻度要求很高，有沒(méi)有
好的方法可以提高鋪板時(shí)細(xì)胞的分布勻度？
首先是細(xì)胞消化后盡量成單顆，鋪板的時(shí)候需要練習(xí)下手法，不要有旋渦產(chǎn)生，導(dǎo)致分布不均勻；除開(kāi)鋪板手法外，細(xì)胞本身特性導(dǎo)致的容易聚團(tuán)生長(zhǎng)，可以嘗試包被培養(yǎng)瓶以后低密度接種細(xì)胞，可能會(huì)達(dá)到比較好的單層貼壁的情況。
消化時(shí)胰酶要預(yù)溫嗎？水浴鍋預(yù)溫可以嗎？
胰蛋白酶屬于酶制品，受溫度影響，反復(fù)的4℃- 37℃的溫度波動(dòng)反而會(huì)導(dǎo)致酶失活，效果不好，所以不建議37℃復(fù)溫。4℃拿出來(lái)可以直接用，加入到細(xì)胞消化的時(shí)候放進(jìn)培養(yǎng)箱就好了。
我養(yǎng)的上皮細(xì)胞消化下來(lái)有很多像葡萄串
一樣的細(xì)胞團(tuán)，吹打也不能讓細(xì)胞分開(kāi)。
這種情況一般還是消化不充分導(dǎo)致，建議可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間，待細(xì)胞與細(xì)胞間的連接打開(kāi)后再進(jìn)行吹散，一般是很容易吹散的。
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